Csoport - Mikromanipulációs alcsoport - Nyúl klónozás - Protokollok

Embrió-előállító rendszer

Laboratóriumunkban párhuzamosan folynak In Vitro Maturációs és sejtamagátültetéses klónozási kísérletek.

A laboratóriumban a különböző úton létrehozott embriókat CO₂ inkubátorokban kultiváljuk 38,5 ºC-on, 5% CO₂-t tartalmazó gázelegyben, 90% relatív páratartalom mellett in vitro (IVC).

A jól működő IVC lehetséget nyújt arra, hogy különböző alkalmazott embriológiai kísérleteket hajtsunk végre. A beavatkozások mikromanipulációs technikák alkalmazását igénylik.

Mikromanipulációs rendszer

A gaméták, embriók mikromanipulálásához szükséges mikropipettákat helyben állítjuk elő .

A mikromanipulációt binokuláris inverz mikroszkópokon végezzük.(Olympus IX 71),amiken a mikromanipulátor egységekhez (Narishige, Eppendorf) csatlakoztatjuk a mikropipettákat.A pipettákban a folyadékáramlást mikroinjektorokkal  (Variocell) szabályozzuk.(1. kép)

1. kép Olympus IX 7, Narishige és Variocell

Klónozási eljárás

A laboratórium legfontosabb feladata hatékony klónozási eljárások kidolgozása.

A klónozás során egy testi sejtet (Kumulusz, fibroblaszt) vagy annak csak a sejtmagját egy, a kromatin állományától előzőleg megfosztott (enukleált) petesejtbe ültetjük majd elektromos és kémiai ágensek segítségével megindítjuk a klónozott sejtkonstrukció (NT konstrukció) sejtosztódását. 

Az embriótenyésztő rendszerben az NT konstrukciók képesek embrió beültetésre alkalmas fejlettséget elérni.

A NT konstrukciók sikeres aktiválásához tanulmányozzuk a különböző parthenogenetikus aktivációs eljárásokat.
A klónozással lérehozott embriókat mélyhűtjük, vagy recipiens állatokba ültetjük.